细胞爬片是细胞生物学相关中的常用本事，用于不雅察细胞时势、进行荧光染色或酶标检测。TUNEL（TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling）践诺则是检测细胞凋一火的热切方法，它通过秀丽细胞DNA链断裂产生的3’-OH终端来秀丽凋一火细胞。用细胞爬片检测细胞凋一火时，细胞容易在践诺经由中脱片，影响践诺的死一火和数据的真正度。今天Elabscience将和群众所有探讨细胞爬片TUNEL践诺中脱片产生的原因及影响，并共享灵验的防脱片设施。

一、脱片的原因与影响

用细胞爬片进行TUNEL践诺，脱片的主要原因不错归结为以下几点：

① 细胞自己的黏效用较差，未能沉稳附着于玻片名义，导致在洗涤、染色和反馈要领中容易零碎。

② 践诺要求不妥，导致细胞凋一火过度而脱片。

③ 践诺要领中的固定不妥、冲洗过于剧烈、反馈温度与时候死一火欠安等皆可能变成细胞脱片。

图1. 细胞爬片脱片（大鼠肺大动脉内皮细胞，DAPI染色）

脱片的影响体目下多个方面：

最初，脱片会导致玻片上细胞数目减少，影响样本的代表性（图1）。尤其是当细胞脱片较为严重时，玻片上的细胞数目可能不及以进行准确的统计学分析。

其次，脱片还会导致细胞染色不均匀（图2），尤其是在TUNEL践诺中，这可能会影响凋一火细胞的检测。脱片引起的细胞散布不均会搅扰荧光信号的不雅察，从而误导践诺数据的解读。

为了保证践诺死一火的默契性和可靠性，必须接纳灵验的设施来减少细胞脱片的发生。

图2. 脱片导致荧光信号散布不均（小鼠神经星形胶质细胞，DAPI染色）

二、提防脱片的设施

针对细胞爬片TUNEL践诺中脱片的原因，咱们不错从以下几个方面优化践诺要求，以减少细胞脱片：

1. 接纳合适的载玻片

玻片的接纳是提防细胞脱片的重要要津。一般提倡使用经过非凡处置的载玻片，如聚-L-赖氨酸（Poly-L-lysine）涂覆的玻片或细胞培养专用的玻片。这些玻片通过改性处置增强了细胞在玻片名义的黏效用，从而减少践诺经由中的脱片昌盛。此外，也不错研讨使用胶原卵白涂覆的玻片，这种玻片适用于需要模拟细胞外基质环境的践诺。

2. 死一火践诺要求

蓄意践诺时不错先进行预践诺，笃定好最好的践诺要求（药物处置浓度、培养时候等），提防细胞因凋一火过度而脱片。

图3. 不同浓度（左10 μm，右5 μm）喜树碱处置的Hela细胞爬片，用一步法TUNEL原位细胞凋一火检测试剂盒

（红色，Elab Fluor® 594）（E-CK-A322）染色践诺死一火

图3中践诺死一火不错看出，左侧践诺要求导致细胞凋一火过度，细胞密度较右图低，凋一火数目比右图高。

因此，蓄意践诺时要缔造克己置的要求，提防细胞凋一火过度。若是践诺要求无法鼎新，不错收罗培养液中凋一火的细胞均匀涂在爬片上制备成细胞涂片后再进行TUNEL践诺，大要接纳流式TUNEL检测（保举：Elabscience®一步法TUNEL流式凋一火检测试剂盒，检测死一火可通过流式细胞仪进行分析，更适用悬浮细胞、贴壁细胞的TUNEL检测）。

3. 死一火细胞密度

在细胞接种时，应合理死一火细胞密度。若是细胞接种过少，细胞之间枯竭相互相沿，更容易在践诺经由中脱片。因此，阐发细胞类型的不同，笃定合乎的接种密度，使细胞在玻片上能较好地铺展并附着。

4. 进行合乎的细胞固定

固定要领是TUNEL践诺中相配谬误的一步。常常使用4%的多聚甲醛进行细胞固定，固定时候死一火在10-20分钟之间。固定时候过短可能导致细胞未能悉数固定，从而在后续的要领中脱片；而固定时候过长，则可能引起细胞的时势改换导致黏效用松开。因此，应阐发细胞类型和践诺要求，优化固定时候，以达到最好的固定恶果。

5. 严格死一火细胞通透的要求

细胞爬片的通透一般接纳0.2%的Triton X-100溶液，若是接纳卵白酶K，可能会导致细胞零碎（图4所示）。

图4. 不同通透方法对比（左图：卵白酶K通透，右图：0.2%Triton X-100通透）

图4中不错看出，通透对TUNEL践诺死一火影响权贵，细胞爬片的通透剂应接纳0.2%Triton X-100。同期还需审视：Triton X-100溶液用PBS稀释，Triton X-100的重大高，可提前1-2天配制并放在4℃保存。

6. 接纳仁爱的洗涤方法

洗涤要领是细胞脱片的高风险要津。提倡在洗涤时幸免剧烈的搅动或冲洗，应接纳冉冉加液或轻轻倾倒的神色来更换缓冲液。同期，洗涤液的温度应尽量接近室温，幸免温差过大引起细胞的应激反馈，从而增强细胞的附着默契性。

但愿这些防脱片的处置方法，能为群众的TUNEL践诺添砖加瓦开yun体育网，升迁践诺的默契性和数据的可靠性。对于TUNEL践诺细胞爬片脱片的先容到此终了，接待暖和Elabscience®，解锁更多细胞情状检测践诺技巧。